Фитогемагглютинин-M (PHA-M) жидкий

Арт N°: L3010

Условия хранения : Хранить в замороженном виде при -20°C
После оттаивания раствор PHA-M стабилен в течение 1 месяца при +2/+8°C. PHA-M может мутнеть при +2/+8°C, но эта мутность не влияет на активность продукта.

Срок годности: 36 месяцев

Состав: После оттаивания каждый мл раствора содержит 5-10мг белка.

Рекомендации при использовании:
- Соблюдать условия хранения продукта;
- Не использовать просроченный продукт;
- Хранить продукт в защищённом от света месте;
- Все операции производить в стерильных условиях (как вариант - с использованием ламинарного воздушного потока);
- Надевать специализированную одежду для работы с продуктом, чтобы избежать контаминации (например, перчатки, маска, гигиеническая шапочка и др.);

Предполагается использование продукта in vitro, только в лаборатории. Не допускается использование в терапии человека и в ветеринарных целях.

Применение
Фитогемагглютинин является белком, получаемым из красной фасоли (Phaseolus vulgaris). Белок состоит из двух видов молекул: лейкоагглютинина в (PHA-L) и эритроагглютинина (PHA-E). Каждый из белков содержит набор из пяти изолектинов, являющимися тетрамерами, скрепленными нековалентной связью. РНА-М является формой мукопротеина и используется для стимуляции клеточной пролиферации в культуре лимфоцитов. PHA-М также имеет сильное  эритро агглютинирующее свойство и первоначально использовался для выделения лейкоцитов из цельной крови.

Инструкция по применению:
1)    Добавить 2-4 мл PHA-M на 100 мл  вышей среды
2)    Наслоите приблизительно 0,5 мл гепаринизированной цельной крови в стеклянную или пластиковую пробирку с 10 мл среды (или 106 жизнеспособных клеток на мл).
3)    Инкубировать культуру 72 часа.
4)    Добавить 0.1-0.2 мл раствора Колцемида (Colcemid) (арт : L0040) в каждую культуральную пробирку.
5)    Инкубировать культуру15-30 минут.
6)    Перенести культуру в пробирку для центрифугирования и центрифугировать при 500 g в течение 5 минут.
7)    Удалить супернатант (надосадок) и вновь суспендировать клетки в 5-10 мл гипотонического 0,075 М раствора KCl (арт : L0643).
8)    Инкубировать при 37°C в течение 10-12 минут.
9)    Центрифугировать при 500 g в течение 5 минут.
10)     Удалить супернатант (надосадок), взболтать клеточный осадок и добавить по капле 5-10 мл свежего, холодного фиксатора, состоящего из 1 части уксусной кислоты и 3 частей метанола.
11)    Оставить при 4°C на 10 минут.
12)    Повторить шаги 10, 11 и 12.
13)    Центрифугировать при 500 g  в течение 5 минут.
14)    Разболтать клеточный осадок в небольшом объёме 0.5-1 мл свежего фиксатора, покапельно нанести на предметное стекло и высушить.
15)    На этом этапе препарат может быть окрашен, например, красителем Орсеин или Гимза. Бандирование методом Гимза – самая распространенная техника.  Для того, чтобы получить дифференциальную окраску (банды)  хромосом, стекла перед окрашиванием предварительно обрабатываются 10-кратным раствором Трипсин-ЭДТА.

Определение снижения качества раствора:
Раствор не должен содержать включения или осадок.
Другими доказательствами ухудшения качества раствора являются изменение цвета или  других физико-химических характеристик.